М.А. ФОМИНА1, Ю.В. АБАЛЕНИХИНА2, А.М. КУДЛАЕВА1, А.А. ТЕРЕНТЬЕВ2
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова,
г. Рязань, Российская Федерация (1)
Российский национальный исследовательский медицинский университет
имени Н.И. Пирогова, г. Москва, Российская Федерация (2)
Цель. Разработать количественный способ оценки селективного изменения компартментализации активности лизосомальных цистеиновых протеиназ.
Материалы и методы. Активность катепсинов В, L, H определялась раздельно во внелизосомальной и лизосомальной фракциигомогенатов тканей крыс линии Wistar, спектрофлуориметрической регистрацией количества продукта расщепления специфических субстратов 7-амидо-4-метилкумарина. Активность кислой фосфатазы определяли с использованием коммерческого набора «Витал Диагностикс СПб» (Россия, СПб).
Результаты. Предложен способ оценки избирательного изменения компартментализации активности лизосомальных цистеиновых протеиназ, основанный на количественном сопоставлении долей внелизосомальной активности соответствующего катепсина и кислой фосфатазы. Результаты выражаются безразмерным коэффициентом селективной компартментализации активности (КСКА), который может принимать 3 диапазона значений. Поскольку в условиях равномерного выхода из лизосом кислой фосфатазы и изучаемого катепси назначение отношения доли внелизосомальной активности приближено к 1, для оценки селективного изменения компартментализации активности катепсина целесообразно производить трактовку отклонения полученного значения от 1 в положительную или отрицательную сторону. Близкие к 1 значения КСКА предлагается в этом случае трактовать как повреждение (лабилизацию) лизосомальной мембраны, степень повреждения оценивается по степени нарастания долей внелизосомальной активности. Положительные значения КСКА свидетельствуют о пермеабилизации лизосомальной мембраны с избирательным (селективным) выходом определенного катепсина во внелизосомальное пространство. Отрицательные значения КСКА на данном этапе представлений о лизосомальныхцистеиновых протеиназах могут трактоваться как результат воздействия факторов, избирательно подавляющих активность изучаемого катепсина во внелизосомальной фракции.
Заключение. Сочетанная трактовка предложенного коэффициента селективной компартментализации активности (КСКА) и показателя доли внелизосомальной активности для конкретной лизосомальной протеиназы дает возможность косвенно оценить избирательную проницаемость лизосомальной мембраны для индивидуального фермента, в том числе при воздействии различных агентов и/или факторов.
Ключевые слова: катепсины, селективная компартментализация, коэффициент.
2018 год, выпуск №2
Биохимия, физиология, биофизика, патологическая физиология
Читать статью (pdf) →
DOI: 10.23888/HMJ201862277-284
Для цитирования:
Фомина М.А., Абаленихина Ю.В., Кудлаева А.М., Терентьев А.А. Способ оценки селективного изменения компартментализации активности лизосомальных цистеиновых протеиназ // Наука молодых (Eruditio Juvenium). 2018. Т. 6, №2. С. 277-284. doi:10.23888/HMJ201862277-284.
Fomina MA, Abalenihina YuV, Kudlaeva AM, Terentev AA. Method of evaluation of selective changes in compartmentalization of activity of lysosomal cysteine proteinases. Science of the young